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    人非小細胞肺癌細胞的傳代及處理方法
    點擊次數:75 發布時間:2022-06-06
    細胞特性  
    1)來源:人肺癌組織  
    2)形態:上皮細胞樣,貼壁生長  
    3)含量:>1x106細胞數  
    4)規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝  
    5)用途:僅供科研使用。  
    二.細胞的培養:  
    1)準備1640基礎培養基87%  
    特級胎牛血清10%  
    GlutaMAX—I谷氨酰胺1%  
    SodiumPyruvate丙酮酸鈉1%  
    P/S青霉素-鏈霉素1%  
    2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。  
    3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。  
    三.細胞處理:  
    1)凍存細胞的復蘇:  
    將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。  
    2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。  
    對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:  
    1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。  
    2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。  
    3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。  
    3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。  
    四、運輸和保存  
    干冰運輸及復蘇好存活細胞  
    (1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。  
    (2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。  
    細胞接收后的處理  
    1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。  
    2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。  
    3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。  
    4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代。
    座機:
    023-63419609
    聯系方式:
    15021010459
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